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關于我們首頁 > 產(chǎn)品中心 > 分子生物學 > PCR/RT-PCR產(chǎn)品 > FSQ-101TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101
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  • TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101
  • 型號:FSQ-101
  • 報價:
  • 地區(qū):上海市
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  • FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒,上海復申生物江浙滬授權(quán)代理商,常年現(xiàn)貨TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101更多現(xiàn)貨產(chǎn)品訂購!
  • 021-34600120
產(chǎn)品詳細介紹

FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒  

產(chǎn)品介紹:

適用于合成Realtime PCRcDNA的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。

本試劑盒是適用于Realtime PCR用cDNA制作的逆轉(zhuǎn)錄反應試劑盒。由于采用了本公司
高性能逆轉(zhuǎn)錄酶『ReverTra Ace』,反應效率非常出色。另外,通過改良,使得帶入到
Realtime PCR反應體系中的逆轉(zhuǎn)錄反應液的影響降到小,即使在PCR反應體系中添加
了多至20%體積的逆轉(zhuǎn)錄反應液,也能表現(xiàn)出良好的反應曲線,因此,適合用于表達量
較少的mRNA的高靈敏度測試。由于精簡了試劑盒的構(gòu)成,可非常簡便地進行操作,僅需
約15分鐘的逆轉(zhuǎn)錄反應,即可得到充分的cDNA。

特征1. 超群的cDNA合成效率
由于使用了恰當比例的mix primer(oligo dT和Random primer)、以及經(jīng)改良的反應緩沖液,可實現(xiàn)高效率的逆轉(zhuǎn)錄反應。

特征2. 反應時間僅需15分鐘
逆轉(zhuǎn)錄反應僅需15分鐘即可完成。此外,即便是要除去對Realtime PCR反應有阻礙的殘留的模板RNA,也無須追加RNase H處理。
特征3. 提高了和Realtime PCR試劑的適應性
通過改良,使帶入到Realtime PCR反應體系的逆轉(zhuǎn)錄反應液的影響降到小。即使在PCR反應體系中添加了多至20% (V/V)的逆轉(zhuǎn)錄反應液,也能表現(xiàn)出良好的反應曲線。因此,適合用于表達量較少的mRNA的高靈敏度檢測。

FSQ-101東洋紡TOYOBO ReverTra Ace qPCR RT Kit Realtime PCR用cDNA合成試劑盒 

規(guī)格參數(shù)Specifications

實驗例1 與用其他公司產(chǎn)品cDNA合成量的比較

以來源于HeLa細胞的total RNA 100ng為模板,根據(jù)各公司試劑盒推薦的條件進行逆轉(zhuǎn)錄反應。然后,在Realtime PCR反應液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分別添加上述的逆轉(zhuǎn)錄反應液各1% (V/V),用Realtime PCR對β-Actin和Polymerase ε的cDNA量進行定量。結(jié)果可見,在使用本試劑盒的情況下,兩個目的片段都有high的收量。 

 實驗例2 RNase H處理與否對檢測靈敏度影響的比較

以來源于HeLa細胞的total RNA 100ng為模板,使用ReverTra Ace qPCR RT Kit(藍線)及另外添附RNase H的B公司cDNA合成試劑盒,按各自推薦的實驗步驟進行逆轉(zhuǎn)錄反應(B公司試劑盒分別按RNase H處理(紅線)/未處理(橙線)兩種方法進行)。然后,按和實驗例1同樣的方法檢測β-Actin的擴增效果。結(jié)果顯示,用B公司的試劑盒RNase H未處理(橙線)的情況下,檢測效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit(藍線)進行反應,即便不追加RNase H處理也能顯示出很高的擴增效率。已經(jīng)過實驗證明,用本試劑盒的情況下,RNase H處理與否靈敏度相等。
※本試劑盒不包含RNase H處理步驟。

實驗例3 模板RNA量的添加量對合成效率影響的探討

在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反應體系(10μl)中,分別添加HeLa細胞由來的total RNA 0.5μg - 0.5pg,分別進行逆轉(zhuǎn)錄反應。然后,采用和實驗例2同樣的方法擴增β-Actin基因。結(jié)果可見,在探討的范圍內(nèi),模板RNA的量和cDNA的收量密切相關,但無論模板RNA量的多寡,仍可維持很高的cDNA合成效率。由此可見,在目的片段濃度有差異的樣品之間,逆轉(zhuǎn)錄反應效率的變化并不大,因此可將定量結(jié)果的誤差控制在小范圍內(nèi)。

簡要備注

Q1. 雖然反應時間僅需15分鐘,但如果延長反應時間,是否可提高cDNA的合成量?
A1. 要對tRNA等高表達量的RNA進行*逆轉(zhuǎn)錄時,延長反應時間可提高合成量,但一般情況下按照標準的推薦條件37℃15分鐘即可。
Q2. 可使用哪些模板RNA?  
 A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各種RNA都可以使用。
Q.3 需要進行RNase H處理嗎?  
 A3. 由于殘留的模板RNA會阻礙PCR反應,所以一般情況下逆轉(zhuǎn)錄反應結(jié)束后都要通過RNase H分解模板RNA。但本試劑盒運用本公司開發(fā)的新系統(tǒng),在逆轉(zhuǎn)錄反應后可用非酶性方法除去模板RNA。因此,逆轉(zhuǎn)錄反應后無需RNase H處理。

 參考文獻

1)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226(2003)
2)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66(2002)
3)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246(2002)
4)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460(2001)
5)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675(2000)
6)S.Lee et al.,Gene,245:253−266(2000)

價格表

 品名及內(nèi)容

 包裝

溫度

 Code No.

 價格

 

ReverTra Ace qPCR RT Kit
?5×RT Buffer
?Enzyme Mix
?Primer Mix
(oligo dTRandom primer
?Nuclease-free Water

40次份*

-20

FSQ-101S

RMB 300

 
 

200次份*×1

-20

FSQ-101

RMB 1,500

 

200次份*×2

-20

FSQ-101B

RMB 2,760

 

200次份*×4

-20

FSQ-101C

RMB 5,000 

 

*反應體系為10μl時的反應次數(shù)。

TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101 TOYOBO原裝PCR用cDNA合成試劑盒FSQ-101

 

 

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