Hygromycin B 潮霉素B(抗生素)
產(chǎn)品信息:
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
FS0012-1G | Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉) | 1g | 600.00 |
FS0012-5G | Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉) | 5g | 2400.00 |
FS0012-10G | Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉) | 10g | 3840.00 |
FS0012-10ML | Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B(50 mg/ml) | 10ml | 680.00 |
FS0012-20ML | Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B(50 mg/ml) | 20ml | 1050.00 |
性狀/儲(chǔ)存 | -20℃保存(干粉),4℃保存(液體) |
產(chǎn)品屬性:
別名 : 濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉
英文名稱 : Hygromycin B
CAS : 31282-04-9
儲(chǔ)存條件 : -20℃
Hygromycin B 潮霉素B(抗生素)生物應(yīng)用:
1) 篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞(植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞);
2) 由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個(gè)不同載體的細(xì)胞株;
雙抗性穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選的抗生素作用機(jī)制及抗性 | |||
抗生素 | 抗性機(jī)制 | 抗性基因 | 哺乳動(dòng)物篩選濃度 |
潮霉素B | 干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀 | Hph | 200~500μg/mL |
G418 | 干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成 | Tn5/Tn601 | 100~1000μg/mL |
Zeocin | 摻入或者切割DNA引起細(xì)胞死亡 | Sh ble | 50~100μg/mL |
blasticidin S | 核糖體上抑制肽鍵形成 | Bsd/BSD | 3~50μg/mL |
3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進(jìn)入病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4)作為驅(qū)蟲藥加入動(dòng)物飼料;
應(yīng)用濃度:
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,濃度需要?dú)缜€來確定。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞·200-500 μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000μg/mL;
產(chǎn)品使用:
使用一:殺滅曲線確定殺死濃度(僅作參考,因個(gè)人檢測(cè)體系而異)
(1)往組織培養(yǎng)級(jí)的96孔板內(nèi)加入未轉(zhuǎn)染細(xì)胞,細(xì)胞密度約50-200細(xì)胞/孔;細(xì)胞貼壁之后,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個(gè)濃度)潮霉素B的200μL新鮮培養(yǎng)基;
(2)37℃,5% CO2培養(yǎng)箱孵育細(xì)胞10-14天;
(3)培養(yǎng)5-7天后更換新的培養(yǎng)液,培養(yǎng)液內(nèi)含有相應(yīng)濃度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用細(xì)胞增殖方法如MTT,CCK-8等評(píng)估細(xì)胞活力;也可以通過檢測(cè)細(xì)胞克隆數(shù)或百分比匯合率來確定毒性效應(yīng)。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細(xì)胞的zui小濃度為篩選濃度。
使用二:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞
(1)對(duì)于貼壁細(xì)胞,直接吸去60mm培養(yǎng)皿內(nèi)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)基,然后加入含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基5-6ml;對(duì)于懸浮細(xì)胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)基,然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(2)5-7天后,如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(3)再孵育細(xì)胞5-7天;
(4)10-14天孵育后,培養(yǎng)體系中只含有能夠表達(dá)潮霉素B抗性表型的活細(xì)胞。因此篩選之后如步驟一,更換不含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基。