- CST抗體相關(guān)問題解答(二)
- 點(diǎn)擊次數(shù)：2784 更新時間：2016-02-21
- 之前的《CST抗體相關(guān)問題解答(一)》中，我們給大家介紹過幾個關(guān)于CST抗體的相關(guān)問題，本文再給大家說說CST抗體其他的一些疑問。
1、CST抗體是否適用于全組織樣本裂解物?
答：CST 并未測試所有抗體是否適用于全組織樣本裂解物，但是 CST 的很多抗體已經(jīng)被其他客戶用于整個組織而且取得成功。
2、CST抗體可用于免疫組化嗎 ?
答：檢測抗體是否可用于福爾馬林固定石蠟包埋樣本，是CST 的一項(xiàng)常規(guī)檢測。那些通過嚴(yán)格驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的抗體才會被推薦用作 IHC-P。我們也在新鮮冰凍組織樣本上檢測抗體，那些染色成功的才會被推薦用作 IHC-F。那些推薦應(yīng)用里面沒有列出 IHC-P 或者 IHC-F 的，可能已經(jīng)失敗，或者沒有被檢測，或者我們沒有用作檢測的特別的組織樣本。建議你 CST，我們可能有該抗體在其它系統(tǒng)表現(xiàn)良好的數(shù)據(jù)?；蛘撸覀兛赡苡羞m用于組織染色的更好的其它產(chǎn)品。
3、假如說明書上某個種屬未被列出與 CST抗體有交叉反應(yīng)，是否意味著這個種屬未被檢測過呢?
答：如果可能的話，CST 科學(xué)家檢測所有 CST 抗體在人、小鼠和大鼠的交叉反應(yīng)性。假如我們沒有獲得某個種屬的陽性結(jié)果，我們就不會列出這個種屬。然而，有可能我們檢測的這個細(xì)胞系包含一個低水平的特定蛋白，或者，我們使用的操作對于那個特定的細(xì)胞系不起作用。因此,我們建議你比較所研究種屬和 CST 抗體驗(yàn)證種屬修飾位點(diǎn)附近的肽段序列 ( 每邊 5 個氨基酸 )。在很多情況下，CST 抗體由免疫人的蛋白序列產(chǎn)生，并通過親和層析高度純化。很多時候，如果序列相同，或者在非磷酸化位點(diǎn)只有 1 或者 2 個氨基酸的不同時，CST 抗體很有可能識別你的蛋白。但是，我們不能保證其實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4、使用 CST抗體時，為什么我不能使用我自己實(shí)驗(yàn)室的 Western blot 操作流程?
答：CST抗體經(jīng)過優(yōu)化以提供zui強(qiáng)的信號、zui少的背景，使用 CST 推薦的Western blot 操作流程，對于終端客戶的優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約時間和材料。
5、為什么CST抗體用于 Western blot 效果不佳?
答：這里有幾個關(guān)于 CST Western blot 流程的細(xì)節(jié)，對于避免丟失信號或高背景是非常關(guān)鍵的。
• 不要過度清洗膜。應(yīng)在 TBS/0.1% Tween-20 中清洗三次，每次5分鐘。過度的清洗會洗掉一抗。推薦的清洗條件已經(jīng)過優(yōu)化以獲得的信噪比，因此是zui強(qiáng)、zui干凈的結(jié)果。
• 不要過度封閉 ( 例如超過 1 小時或者過夜 )。在一些抗體中發(fā)現(xiàn)，過度封閉會減少特異信號。確保查閱每個產(chǎn)品的說明書以得到每個抗體推薦的封閉時間。
• 一般來說，針對兔多抗或兔單抗，使用抗兔二抗：#7074;針對鼠單抗，使用抗鼠二抗：#7076。
• 確認(rèn)抗體的說明書上交叉反應(yīng)部分有列出你所檢測的種屬。
• 確認(rèn)你的上樣量達(dá)到 20 μg 細(xì)胞裂解液。
• 確認(rèn)誘導(dǎo)的細(xì)胞裂解液樣本蛋白已活化。
如果您對于CST抗體還有其他的疑問，咨詢，我們竭誠為您解答。
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